大肠杆菌转位酶MraY单克隆抗体的制备与特性研究

【摘要】MraY是催化UDP-N-acetylmuramicacid-pentapeptide（磷酸-N-乙酰胞壁酸酯-胸腺喷丁）和脂质载体十一异戊烯磷酸合成细胞壁前体脂质I的一种膜嵌入式酶。MraY有望成为开发抑制肽聚糖合成的新型抗菌药物的靶标。phiX174噬菌体通过表达E蛋白抑制转位酶MraY的活性，从而导致宿主细胞的裂解，形成的菌蜕是一种具有佐剂性质且能携带外源物质的新型疫苗递送体系。因此，对MraY蛋白的研究有重要的应用意义。本研究以纯化的MraY-AB蛋白（AB为MraY蛋白亲水区的两个主要抗原区）为抗原，免疫BALB/c小鼠。经三次免疫，取效价较高的免疫脾细胞，融合小鼠骨髓瘤细胞SP2/0，经多次亚克隆筛选，获得了一株能稳定分泌抗MraY-AB蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，命名为MraY-AB-H11（以下简称M-H11）。将该细胞株扩大培养，小鼠腹腔注射制备腹水，纯化后获得M-H11单抗。M-H11单抗的亚类为IgG2b，轻链为κ链。经细菌生长抑制试验发现，该单抗在体内外均能明显抑制大肠杆菌BL21（DE3）pLysS菌株的生长。而对两株野生型耐药大肠杆菌、大肠杆菌DH5α、ompT基因缺失株DH5α（△ompT）以及大肠杆菌BL21（DE3）菌株，均未发现有抑制活性。但对转入大肠杆菌BL21（DE3）pLysS质粒的大肠杆菌BL21（DE3）菌株则恢复了抑制生长活性。
【作者】衣菲；
【导师】刘思国；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】转位酶MraY；单克隆抗体；抑菌；

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